[Paper] Use of Digital Image Analysis, Viability Stains, and Germination Assays to Estimate Conventional and Glyphosate-resistant Cotton Pollen Viab..

September 24th, 2007 by basa
作者: Wendy A. Pline, Keith L. Edmisten, Tim Oliver, John W. Wilcut, Randy Wells,
and Nina S. Allen
出處: Crop Science (2002) 42: 2193-2200
pdf file
作者比較了四種不同估計花粉活性的方法，分別是Brewbaker & Kwack (B & K) medium (就是蔗糖溶液以及少許的硼和鈣、Pollen
germination test in vitro)、B & K medium 加上 aniline blue、fluorochromatic reaction method (FCR)、還有Alexander’s stain。
作者用棉花的花粉進行測試。除了以上述四種方式估計花粉活性，作者也對棉花進行人工授粉實驗，得到結實率以後再和四種活性測試的值進行比較，看看哪一種方法和結實率的相關性最高。

此外，作者嘗試將花粉萌發的結果照相紀錄，並用影像軟體分析花粉管的面積，藉由比較花粉管面積的大小，可以增加對花粉活性的參考資
料。實驗的結果顯示，B & K medium和結實率的相關性最高，除此之外，作者認為B & K medium實驗簡單，需要的特殊器材少，以及允許影像處理分析花粉管的面積，因此是值得推薦的方法。

最後再補充一下為什麼作者的試驗方法中，其中一項是在B & K medium中加入aniline blue。由於在蔗糖溶液中，花粉有時會受到滲透壓的影響而爆裂放出一些花粉內的物質，這種情形並不是真正的花粉萌發，但是在外觀上有時會很類似正常萌發的花粉管，因此造成計算萌發率時的困擾。正常的花粉管含有callose，callose會出現在花粉管中(callose plug)，而且花粉管璧的成分也包含callose，因此我們可以試著用aniline blue對花粉管染色，如果是正常的花粉管，就會成功染上色，藉以判斷花粉是否正常萌發。